液氮保存已成为工业微生物菌种保存的最佳方法。工业微生物菌种保存方法的智能揭示:
具体方法是:将细胞悬浮在一定的分散剂中,或直接冷冻琼脂培养基上培养的菌株,然后移动到液氮中(-1966) ℃)或液氮气相环境 (-156℃)保存。液氮冷冻应严格控制冷却速度。
液氮冷冻保存微生物菌株的具体步骤是:制备冷冻保存菌株的细胞悬浮液,分装到0.5~1 在ml特殊耐低温玻璃安瓿或液氮冷藏专用塑料瓶中,玻璃安瓿用酒精喷灯密封。然后以 (1-2) ℃/min冷却速度冷却,直到细胞冻结点达到相对温度以上( 通常是 -30 ℃)。细胞冻结后,冷却速度降至1 ℃ /min,直到温度达到-50 ℃迅速将安瓿移入液氮罐 (-196 ℃ )或气相(-156 ℃ )中保存。
如果没有控速冷冻机,通常可以用以下方法代替:将安瓿或液氮瓶放在-70 在冰箱里冷冻4 h,然后迅速移入液氮罐进行保存。此外,最常用的液氮冷冻保护剂是二甲亚啶和甘油,其浓度一般为甘油 10 %,二甲亚砜5 %。甘油一般用高压蒸汽灭菌,二甲亚胥过滤灭菌。
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